纯氟油Fluo-Oil 135(氟油3M Novec HFE7500电子氟化液的替代（dài）品)

Fluo-Oil 135（简称FO135） 是一种（zhǒng）纯氟化（huà）油，可（kě）用于替（tì）换氟油3M Novec HFE7500电子氟（fú）化液。 Fluo-Oil 135氟油的化学和（hé）物（wù）理化学性质与3M Novec HFE7500 相似，如（rú）下表所示:

优势

生物相容性、可（kě）重（chóng）复性和（hé）稳（wěn）定性。

如何使用（yòng）？

氟油Fluo-Oil 135用（yòng）于稀释FluoSurf Neat表面活（huó）性（xìng）剂或已经用Fluo-Oil 135油稀释的表（biǎo）面活性剂。

（由（yóu）于（yú）FluoSurf Neat表（biǎo）面活性剂是（shì）一种PFPE-PEG结构（gòu）的复杂（zá）高效纯表面（miàn）活性剂，因为类似于PFPE-PEG结（jié）构的纯表面活性剂如FluoSurf Neat，Surf-Drop，PFPE-PEG-PFPE两嵌段或三嵌段表面（miàn）活性剂，Surf 含氟表面（miàn）活性剂等（děng），基（jī）本上都可以使用纯氟油Fluo-Oil 135进行稀释。稀释（shì）的浓度从0.2%到12%之间。）

保（bǎo）存

室温下避（bì）光保存

安全注意事项（xiàng）

● 避（bì）免吸入（rù）、摄入和接触皮肤和（hé）眼睛

● 穿（chuān）戴（dài）耐化学腐蚀的个（gè）人防护（hù）装（zhuāng）备

● 戴上合适的手套（tào）

● 穿合适的防护服

● 戴侧护罩的安全（quán）眼镜

与3M HFE7500油产生液滴性能（néng）的测试比较（jiào）

分别用3M HFE7500和Fluo-Oil 135氟化油稀释FluoSurf neat表（biǎo）面（miàn）活性（xìng）剂，得到4w/w%的质（zhì）量浓度。

水滴产生或油包（bāo）水液滴产生的两（liǎng）相流速：

油相流速为300μL/hr，水相流（liú）速为（wéi）100μL/hr。

水相为PBS溶液或100μM荧光素的PBS溶（róng）液（用于测试液（yè）滴的泄露）

倒置显微镜观察和（hé）Image J软件分析。

一、液滴（dī）尺寸及其分布

在Fluo-Oil 135和HFE7500油中，产生相似尺寸（cùn）的水滴。在（zài）既定流（liú）速参数下，液滴的平均直径为110μm。液滴尺寸的CV分（fèn）别为2.3%（Fluo-Oil 135油）和2.9%（HFE7500油）。

二、液滴稳定性

大多数研究团队使用液滴微流（liú）体进行细（xì）胞封装或 PCR 应用。 因此，需要通（tōng）过 PCR 的加热（rè）循（xún）环以及在 37°C 下（xià）长期（qī）孵（fū）育来（lái）产生稳定的（de）液滴。 表面活性剂的选（xuǎn）择（zé）至关重（chóng）要，但选择油同样重要（yào），以（yǐ）确保可重（chóng）复的实（shí）验（yàn）以及单分散液滴群的生成（chéng）和保存。

分（fèn）别（bié）从三个方面测试（shì）液滴的稳定性：一是（shì）把液滴重新（xīn）注入到（dào）玻璃观察腔室（shì）内；二是经典的（de）PCR热循环过程，循环过（guò）程（chéng）30次（cì），每（měi）次热循环为98°C运（yùn）行10s, 50°C运行5s, 72°C运行10s；三是置（zhì）于37℃的培养箱内放置3天。对1万个（gè）液滴进行分析（xī）。

无论是在 Novec™ HFE 7500 还是 Fluo-Oil™ 135 中（zhōng）形成（chéng） FluoSurf™ 稳定的液滴，在 PCR 加热循环后或在 37°C 孵育（yù） 3 天后，液滴（dī）平（píng）均尺寸在生成（chéng）时保持（chí）不变 [约 110μm (0.7nL)] 。此（cǐ）外，液滴种群仍（réng）然是单分散的。 根据统计分析，计算出在（zài）加热循（xún）环后，只有 5% 的整体液（yè）滴的大小（xiǎo）与平均初始（shǐ）液滴直径的差（chà）异超过（guò） 10%。

将氟化油从 Novec™ HFE 7500 切换到（dào） Fluo-Oil™ 135 对液（yè）滴稳定性没有影响（xiǎng）。

三、液滴内的分（fèn）子（zǐ）滞留

基于液滴的（de）化学或生化分析依（yī）赖于（yú）试剂在单个液滴中（zhōng）保持隔离。 泄漏到连续相和液滴之间的交（jiāo）换，即使很低，也（yě）会（huì）影响结果的完整性，因此，分子保（bǎo）留是选（xuǎn）择氟化油时要考（kǎo）虑的重要（yào）参数。 众所（suǒ）周知，氟化油会限制液滴之间的（de）分子交（jiāo）换，因此应验证（zhèng）切（qiē）换油的影响。

同时生成两种油包水乳（rǔ）液[“空”（负载 PBS）和“满”（负载荧光（guāng）素）液滴（dī）]，一次使（shǐ）用 Novec™ HFE7500，然（rán）后（hòu）使用（yòng） Fluo-Oil™ 135 作（zuò）为连（lián）续相。 两种（zhǒng）混合（hé）物，每一种（zhǒng）都（dōu）包含两个种（zhǒng）群，在 37°C 下孵育，并在（zài）不同的时间点拍摄照片。 使（shǐ）用 ImageJ 软（ruǎn）件对液滴内荧光强度的演（yǎn）变进行了（le）统计定量分析。

上图显示了两个群体之间平均荧（yíng）光强度差异的演变（biàn）（染料加载（zǎi）和空液滴）以（yǐ）及在初始（shǐ）时间点和（hé） 48 小时后相关的（de）荧光和明场图片。

在 24 小时的过程中，两种氟化油产（chǎn）生的液滴中荧（yíng）光（guāng）素的泄漏率相似（约（yuē） 15% 泄漏），并且在 Fluo-Oil™ 135 中产生液滴的情（qíng）况下保持恒定 3 天（tiān）。相反，在 24 小时后， Novec™ HFE7500 中液滴的泄漏继（jì）续减（jiǎn）少并达到 30% 左（zuǒ）右。 这种较长孵育时间的较差（chà）保（bǎo）留性能可归因（yīn）于后（hòu）一（yī）种油（yóu）的粘（zhān）度略低，加速了液滴之间更快（kuài）的分子交换。

结论

对于基（jī）于液滴（dī）的微流（liú）体应用，从一种氟（fú）化油类（lèi）型切换到另一种（zhǒng）类型可能会对微（wēi）流体实验的过程产生重（chóng）大影响，尤其是对液滴的（de）有（yǒu）效生成产生（shēng）重大（dà）影响（xiǎng）。 在氟油3M Novec™ HFE7500电子氟化液 和 氟油Fluo-Oil™ 135 的情况下，已证实（shí）更换（huàn）这两（liǎng）种氟化油对实验条件（jiàn）和结果没有影响。 当使用 Fluo-Oil™ 135 作为（wéi）连续相时，甚至可以观察（chá）到荧光素在（zài）液滴内的更（gèng）好保留。

氟化油Fluo-Oil™ 135 是用于液滴微流体应用（yòng）的3M Novec™ HFE7500 氟油 的有效替代品（pǐn）。